Nephelometry and Turbidimetry - Instrumental Methods of Analysis B. Pharma 7th Semester

నెఫెలోమెట్రీ మరియు టర్బిడిమెట్రీ

లక్ష్యాలు

సెషన్ ముగింపులో విద్యార్థి చేయగలరు

•       ఘన ఔషధ పదార్థాలను   నిర్ణయించే ముఖ్యమైన పద్ధతులుగా నెఫెలోమెట్రీ మరియు టర్బిడిమెట్రీని గుర్తించండి 

•       నెఫెలోమెట్రీ మరియు టర్బిడిమెట్రీని వేరు చేయండి మరియు సరిపోల్చండి

•       నెఫెలోమెట్రీ మరియు ఫ్లోరిమెట్రీ మధ్య సరిపోల్చండి మరియు వేరు చేయండి

•       నెఫెలోమెట్రిక్ నిర్ణయాలలో పొందిన   డేటాను   వివరించండి 

నెఫెలోమెట్రీ:

•       నెఫెలోమెట్రీ అనేది సస్పెండ్ చేయబడిన కణాలను కలిగి ఉన్న కువెట్ నుండి చెల్లాచెదురుగా ఉన్న కాంతిని కొలవడానికి సంబంధించినది.

•        ఒక నెఫెలోమీటర్ యొక్క భాగాలు లైట్ స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ వలె ఉంటాయి, డిటెక్టర్ సంఘటన కాంతి నుండి ఒక నిర్దిష్ట కోణంలో ఉంచబడుతుంది.

•       డిటెక్టర్ అనేది చెల్లాచెదురుగా ఉన్న కాంతిని గుర్తించడానికి ఒక స్థానంలో ఉంచబడిన ఫోటోమల్టిప్లియర్ ట్యూబ్.

•       చాలా చెల్లాచెదురుగా ఉన్న కాంతిని కనుగొనే కోణం ఆధారంగా డిటెక్టర్‌లను 90 ^o , 70 ^o లేదా 37 ^o వద్ద ఉంచవచ్చు .

టర్బిడిమెట్రీ

•       టర్బిడిమెట్రీ (టర్బిడిటీ నుండి ఈ పేరు వచ్చింది) అనేది దానిలో సస్పెండ్ చేయబడిన కణాల వికీర్ణ ప్రభావం కారణంగా ప్రసారం చేయబడిన కాంతి యొక్క తీవ్రత యొక్క నష్టాన్ని కొలిచే ప్రక్రియ.

పద్ధతి యొక్క ఎంపిక:

ద్రావణంలో ఉన్న సస్పెండ్ చేయబడిన కణాల ద్వారా చెల్లాచెదురుగా ఉన్న కాంతి పరిమాణంపై ఆధారపడి ఉంటుంది.

•       TURBIDIMETRY: అధిక conc .సస్పెన్షన్లు

•       నెఫెలోమెట్రీ: తక్కువ conc. సస్పెన్షన్‌లు మరింత ఖచ్చితమైన ఫలితాలు

 

నెఫ్లోమెట్రీ మరియు టర్బిడిమెట్రీ మధ్య వ్యత్యాసం

	నెఫ్లోమెట్రీ	టర్బిడిమెట్రీ
నిర్వచనం	చెదరగొట్టబడిన దశ యొక్క ఏకాగ్రత యొక్క విధిగా సంఘటన కాంతి దిశకు లంబ కోణంలో చెల్లాచెదురుగా ఉన్న కాంతి యొక్క తీవ్రత యొక్క కొలత, ఇది చాలా పలుచన సస్పెన్షన్లకు (100 mg /L ) అత్యంత సున్నితంగా ఉంటుంది.	చెదరగొట్టబడిన కణాలతో ఒక మాధ్యమం గుండా కాంతి వెళుతుంది, కాబట్టి ప్రసారం చేయబడిన కాంతి యొక్క తీవ్రత కొలుస్తారు.
ఉపయోగించిన పరికరం	నెఫెలోమీటర్	స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్
కాంతి రకం కొలుస్తారు	చెల్లాచెదురైన కాంతి	ప్రసారం చేయబడిన కాంతి
ఫోటోమీటర్ యొక్క అమరిక	మూలం నుండి కాంతి వ్యాప్తి దిశకు లంబ కోణంలో చెల్లాచెదురుగా ఉన్న కాంతిని కొలవండి. ఇది కదిలే డిటెక్టర్లు కావచ్చు, ఇది ఆపరేటర్‌ను గుర్తించే కోణాన్ని మార్చడానికి అనుమతిస్తుంది	మూలం నుండి కాంతి యొక్క ప్రచారం వలె అదే దిశలో తయారు చేయబడింది.
క్లినికల్ ఉపయోగాలు	Ag-Ab ప్రతిచర్య, ఇమ్యునో కాంప్లెక్స్ ప్రతిచర్య, ppts, లిపోప్రొటీన్లు	Ag-Ab రియాక్షన్, ఇమ్యునో కాంప్లెక్స్ రియాక్షన్, ppts, కాలేయం పనిచేయకపోవడం, మూత్రంలో ప్రోటీన్ లేదా CSF

వాయిద్యం:

నెఫెలోమీటర్

టర్బిడిమీటర్లు

1- కాంతి మూలం:

•       టంగ్‌స్టన్: దీని తక్కువ తీవ్రత తక్కువ కాంతి వికీర్ణంతో నమూనాలకు తక్కువ ఉపయోగకరంగా ఉంటుంది.

•       ప్రత్యామ్నాయాలు: క్వార్ట్జ్ హాలోజన్ ల్యాంప్ , జినాన్ ల్యాంప్ మరియు లేజర్ ఇవి టంగ్‌స్టన్ ల్యాంప్ కంటే ఎక్కువ తీవ్రతను కలిగి ఉంటాయి.

2- లెన్స్ అసెంబ్లీ:

•       లెన్స్ అసెంబ్లీ ద్వారా కాంతి నమూనా హోల్డర్‌లోకి ప్రవేశిస్తుంది.

3- మోనోక్రోమేటర్ :

•       నమూనా మరియు కాంతి మూలం మధ్య వడపోత చొప్పించడానికి సదుపాయం ఉంది

 4- డిటెక్టర్ (ఫోటో-సెల్):

•       ఇది చెదురుమదురు కాంతి నుండి జోక్యాన్ని తగ్గించడానికి రక్షణగా ఉంటుంది.

5-పరికరాన్ని చదవండి:

•       డిటెక్టర్ ద్వారా కాంతి తీవ్రత విద్యుత్ సిగ్నల్‌గా మార్చబడుతుంది.

టర్బిడిమెట్రీ మరియు నెఫెలోమెట్రీలో పరిగణనలు: 

• టర్బిడిమెట్రీ & నెఫెలోమెట్రీలో ప్రతిచర్య బీర్ యొక్క చట్టాన్ని అనుసరించదు 

• కాబట్టి, ప్రామాణిక వక్రతలు తప్పనిసరిగా ప్లాట్ చేయాలి మరియు తెలియని వాటి యొక్క ఏకాగ్రత ప్రామాణిక వక్రరేఖ నుండి నిర్ణయించబడుతుంది. 

• ప్రామాణిక వక్రరేఖ కోసం ఉపయోగించే ప్రామాణిక పరిష్కారం తప్పనిసరిగా సస్పెన్షన్‌లో తెలియని పరిమాణాన్ని కలిగి ఉండాలి.

• పరికరంలో cuvette ఉంచడానికి ముందు నమూనాను బాగా కలపండి మరియు, b) కొలత అంతటా ప్రతి నమూనా యొక్క కొలత కోసం అదే సమయాన్ని ఉంచండి. 

• కైనెటిక్ రియాక్షన్‌లు (సమయంతో చర్య యొక్క పురోగతిని కొలవడం) అధిక స్థాయి ఖచ్చితత్వం, సున్నితత్వం, ఖచ్చితత్వం మరియు ముగింపు-పాయింట్ ప్రతిచర్యల కంటే తక్కువ సమయాన్ని అందిస్తాయి (ప్రతిచర్య ప్రారంభంలో మరియు ముగింపులో ప్రతిచర్యను కొలవడం)

తరంగదైర్ఘ్యం యొక్క ఎంపిక

• ద్రావణం మరియు సస్పెండ్ చేయబడిన కణాలు రెండూ రంగులేనివి అయితే, కనిపించే పరిధిలో ఏదైనా వేవ్ పొడవును ఉపయోగించండి

• ద్రావణం రంగులో ఉన్నప్పటికీ, కణాలు రంగులో లేకుంటే, ద్రావణం కోసం కనీస శోషణను అందించే వేవ్ పొడవును ఉపయోగించండి

• కణాలు రంగులో ఉంటే మరియు ద్రావణం రంగులేనిది అయితే, కణాలతో గరిష్ట శోషణను అందించే తరంగదైర్ఘ్యాన్ని ఉపయోగించండి

• ద్రావణం మరియు కణాలు రెండూ రంగులో ఉంటే రెండు తరంగదైర్ఘ్యాలను ఉపయోగించండి; ఒకటి ద్రావణానికి కనీస శోషణను ఇస్తుంది మరియు మరొకటి కణాలకు గరిష్ట శోషణను ఇస్తుంది. కణాల శోషణ నుండి ద్రావణ శోషణను తీసివేయండి.

టర్బిడిమెట్రీ యొక్క క్లినికల్ అప్లికేషన్స్

•       ట్రైక్లోరోఅసిటిక్ యాసిడ్‌ని ఉపయోగించి చిన్న పరిమాణంలో ప్రోటీన్ (mg/L పరిమాణం) కలిగి ఉండే మూత్రం మరియు CSF వంటి జీవ ద్రవాలలో మొత్తం ప్రోటీన్ యొక్క గాఢతను నిర్ణయించడం

•       స్టార్చ్‌ను సబ్‌స్ట్రేట్‌గా ఉపయోగించి అమైలేస్ కార్యాచరణను నిర్ణయించడం. టర్బిడిటీలో తగ్గుదల అమైలేస్ చర్యకు నేరుగా అనులోమానుపాతంలో ఉంటుంది.

•       ట్రైగ్లిజరైడ్స్‌ను సబ్‌స్ట్రేట్‌గా ఉపయోగించి లైపేస్ కార్యాచరణను నిర్ణయించడం. టర్బిడిటీలో తగ్గుదల లైపేస్ కార్యకలాపాలకు నేరుగా అనులోమానుపాతంలో ఉంటుంది.

నెఫెలోమెట్రీ యొక్క క్లినికల్ అప్లికేషన్స్.

•       యాంటిజెన్-యాంటీబాడీ ప్రతిచర్యలు ఉన్న చోట తెలియని వాటి సాంద్రతలను గుర్తించడానికి విస్తృతంగా ఉపయోగిస్తారు

•       సీరం మరియు ఇతర జీవ ద్రవాలలో ఇమ్యునో గ్లోబులిన్ల (మొత్తం, IgG, IgE, IgM, IgA) నిర్ధారణ

•       వ్యక్తిగత సీరం ప్రోటీన్ల సాంద్రతలను నిర్ణయించడం; హిమోగ్లోబిన్, హెప్టోగ్లోబిన్, సి-రియాక్టివ్ ప్రొటీన్‌ను బదిలీ చేయడం, !1-యాంటిట్రిప్సిన్, అల్బుమిన్ (ప్రతి ప్రోటీన్‌కి ప్రత్యేకమైన ప్రతిరోధకాలను ఉపయోగించడం)

•       కణాల పరిమాణం మరియు సంఖ్యను నిర్ణయించడం (లేజర్-నెఫెలోమీటర్}

సారాంశం

•       నెఫెలోమెట్రీ మరియు టర్బిడిమెట్రీ కాంతి   పరిక్షేపణంపై ఆధారపడి ఉంటాయి 

•       ఘన వ్యాప్తిని నిర్ణయించడానికి అవి ఉపయోగించబడతాయి

•       ఏకాగ్రత, ఆకారం మరియు కణాల పరిమాణం పద్ధతి యొక్క ఎంపికను నిర్ణయిస్తాయి

•       నెఫెలోమెట్రీలో, వెదజల్లే కాంతి యొక్క తీవ్రతను కొలుస్తారు

•       టర్బిడిమెట్రీలో చెదరగొట్టిన తర్వాత ప్రసారం చేయబడిన కాంతిని కొలుస్తారు.

•       అనేక విక్షేపణల యొక్క స్థిరత్వం అనిశ్చితంగా ఉంది మరియు అందువల్ల ఫార్మజైన్ యొక్క సూచన ప్రామాణిక వ్యాప్తి ఉపయోగించబడుతుంది.

 PDF గమనికల కోసం డౌన్‌లోడ్ బటన్‌పై క్లిక్ చేయండి